抗体的保存方法一般会直接影响抗体的活性和使用效果。在保存得当的情况下,大部分抗体可以存放数月甚至数年,一般情况需严格按照抗体说明书来进行保存。

抗体保存温度和条件

① 抗体收到后,需在12000rpm离心1~5分钟,再打开管盖进行分装和保存,如果抗体体积不足50 ul,可延长离心时间至 5 分钟,从而确保抗体全部离心下来。

② 对于多数抗体而言,分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是最佳选择。腹水形式的产品收到后需立即冻存,因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在置于4℃条件会导致抗体的降解。

  • 分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。
  • 小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于4℃。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl;等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
  • 抗体工作液应该当天配制当天用完,在4℃尽量不要超过1天。

③ 抗体的运输:一般选择4℃运输,避免了反复冻融对抗体活性的损害;如若选择干冰运输,收到抗体是冰冻的,分装时解冻,会增加一次冻融的过程,所以运输过程中尽量避免干冰运输。

特殊抗体保存条件

  • 酶联抗体:保存在4℃,避免冻存以降低或丧失酶活性;
  • 偶联抗体:需保存在棕色管或是用锡箔纸避光于4℃保存,荧光抗体对光敏感,操作时应严格避光;
  • IgG3的同型对照:保存于4℃避免冻存,反复冻融会导致抗体变性,形成多聚体;

抗体保存注意事项

① 加入甘油:对于大多数抗体,可加入50%的甘油来避免反复冻融。甘油在-20℃可降低冰点,但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃,该温度已经超过了甘油的冰点;

② 加蛋白保护剂:蛋白在高浓度时不易降解,正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因,同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。

③ 加入叠氮化钠:为了防止微生物污染,经常选择加入叠氮化钠到抗体中(终浓度 0.02% (w/v))。但在下述情况中不能使用叠氮化钠:

  • 抗体用于染色或处理活细胞,用于体内研究。叠氮化钠在抵抗微生物的同时,对其它大部分有机物也是有毒的,因为它阻断了线粒体的 细胞色素电子传递系统cytochrome electron transportsystem。
  • 要偶联带有氨基的抗体。叠氮化钠会干扰任何含有氨基的偶联,因此在进行偶联之前,应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存,但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体,硫柳汞 (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂。

此外,如果需要去除叠氮化钠,可以通过凝胶电泳或过滤的方式(IgG 的分子量是 150kDa,叠氮化钠的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。