iTRAQ/ TMT技术服务

iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是一种多肽体外标记技术。该技术采用4-plex或8-plex同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,进行LC-MS/MS分析,可同时比较多种不同样本中蛋白质的相对表达含量。

TMT(Tandem Mass Tag)技术也是一种多肽体外标记的方法,采用2-plex、6-plex或10-plex同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。

iTRAQ是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术; TMT技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。TMT与iTRAQ试剂在结构和检测原理上基本类似,都是由报告基团、平衡基团和肽反应基团三部分组成。

服务内容

服务 要求 交付 周期
iTRAQ/ TMT 干冰运输
详细要求见样品要求
蛋白鉴定及定量结果表
肽段鉴定及定量结果表
差异蛋白结果表
生物信息学分析结果
质谱原始数据
实验报告
5-7周

服务流程

服务流程
该图显示了iTRAQ/TMT定量蛋白质组学实验的基本流程。

第一步,从样品中提取蛋白。

第二步,对提取后的蛋白样品进行还原烷基化处理,打开二硫键以便后续步骤充分酶解蛋白。

第三步,用Brandford法进行蛋白的浓度测定。

第四步,SDS(十二烷基磺酸钠)-PAGE。

第五步,取等量蛋白Trypsin酶解。

第六步,用iTRAQ/TMT试剂标记肽段。

第七步,将标记后的肽段进行等量混合。

第八步,对混合后的肽段使用强阳离子交换色谱(Strong Cation ExchangeChoematography,SCX)进行预分离。

第九步,通过Orbitrap Fusion Lumos分析鉴定。

iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析技术优点

  • 高通量:8-plex iTRAQ和10-plex TMT可同时标记最多8组或10组样本;
  • 灵敏度高:低丰度蛋白也能检出;
  • 定量准确:不同标记的肽段等量混合后上机,避免技术误差,提高检测效率。
  • 所采用的标本来源广泛,除培养细胞、组织外,还包括血清/血浆、唾液、脑脊液、鼻分泌物和泪液等。

样品要求

样本类型 要求
组织样品 动物样本>200mg,植物样品>1g,酵母、微生物等干重200mg
细胞样品 1X107个细胞
蛋白样品 蛋白类样品≥500 μl, 浓度≥1 μg/μl;肽段样品≥50 μg;
蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可
co-IP样品 蛋白需求量在2-5ug左右,在寄送蛋白样品中不要包含去污剂(例如SDS)以及高的氧浓度
血液样品 >1ml(血浆注意用EDTA防凝),血清≥0.2-0.5ml,解冻后血细胞会破裂,蛋白溶出来会影响分析,因此一般不建议送全血。如直接送提取好的蛋白,请去除高丰度,并附上去除高丰度前后的胶图。
其他体液 尿液≥2ml,唾液≥500ul、脑脊液≥1ml、泪液≥0.1ml、支气管灌洗液≥23ml
注意:-80℃保存,干冰运输