铭研生物以客户至上为原则,提供抗体相关领域的解决思路与方案。涉及领域包括上游的抗体发现、抗体测序和抗体工程,到下游应用阶段的大规模抗体表达、抗体分析和抗体标记。作为下游应用的重要一环,抗体标记对于基于免疫的测定是必需的(如Western blot,ELISA,流式细胞术,免疫组化和免疫荧光),也可用于从复杂的蛋白混合物中分离和纯化某个目标蛋白。抗体标记物包括小分子、酶蛋白、荧光染料和放射性同位素等。这些标记物各有优缺点,应根据不同的需求应用于不同的实验。我们可以在抗体生产的基础上为您提供生物素标记,HRP,FITC,同位素标记服务。更多详情,请联系我们

•  生物素标记

生物素(Biotin)是一种小分子(244.3 Da),也被称为维生素H,广泛分布于动植物组织中。生物素标记生物素作为最常见的抗体标记物之一,源于抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白对其表现出强大的亲和力,这是自然界已知的最强非共价相互作用之一。需要注意的是,在检测的过程中,生物素只用作固定连接,而不用作信号检测。用生物素标记蛋白质或抗体的过程一般也称之为生物素化(Biotinylation)。

生物素的小分子量是它的优势,能够与抗体反应快速而高效,且不易被外界环境影响(包括试剂浓度,PH环境,和蛋白变性剂等有机溶剂)。更重要的是,由于其较小的尺寸,生物素不会影响抗体的生物活性。而且,生物素与抗生物素蛋白的高特异性也可以在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
铭研提供两种生物素化标记方案,一是酶标记法,另一种是传统的化学标记法。更多详情,请直接与我们联系。

•  HRP标记

辣根过氧化物酶(HRP), 是一种糖蛋白,分子量约为44 KDa。其广泛分布于植物界,在辣根中含量高而得名。不同的底物在HRP的氧化能力下,直接产生颜色变化、化学发光或荧光信号,这使得HRP成为基于抗体-抗原检测分析领域中最常用的酶标记之一。广泛应用于Western blot, ELISA, and 免疫组化等。

HRP与抗体偶联有两种常见方法。一是戊二醛法,利用戊二醛的两个醛基与HRP和抗体上的氨基结合,形成HRP-戊二醛-抗体结合物。另一种方法是简易过碘酸钠标记法,是利用碘酸盐氧化HRP的糖化部分形成醛基,再通过醛基与抗体分子的氨基结合,形成HRP标记抗体。
FITC荧光素标记

•  FITC荧光素标记

常见的荧光标记物异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate, FITC),其异硫氰酸酯(Isothiocyanate)可与蛋白质或抗体的伯胺基团反应,从而应用于标记抗体。一个抗体分子上可以同时标记15-20个FITC分子,并不干扰与抗原结合的能力。FITC的荧光性质包括在约495nm处的吸光度最大值和520nm的发射波长,可以应用于荧光显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪等定性、定位或定量检测。
荧光素(Fluorescein)能在光的照射下,吸收光能进入激发态,当反回基态时,以电磁辐射的形式放出所吸收的光能,从而产生发光现象。荧光检测相较于上述的标记物,能够更加准确、特异、灵敏、快速地检测出微量及超微量的抗原物质。想了解或选择其他荧光素衍生物?马上咨询

•  同位素标记

同位素是特定化学元素的变体,其质子和电子数目不变,中子数有所不同。同位素标记在生物学领域可以提供生物大分子的结构位点的特异性研究,使分子易于通过质谱和核磁共振检测,被同位素均匀标记的抗体等蛋白质样品可以提供丰富的结构信息。此外,用细胞培养物中的氨基酸稳定同位素标记中,稳定同位素用于定量蛋白质。
FITC荧光素标记
同位素标记有很多优点,例如可以保持目标分子的物理化学性质,并且具有成本效益且易于使用。常见的同位素标记物有2H、13C和15N等。标记的化合物如13C标记的葡萄糖或甘油和15N标记的氯化铵或氯酸铵可以容易地掺入生长培养基中用于抗体等蛋白质表达。通过工程菌或细胞体内的酶途径转化为氨基酸中可预测的位置,最终表达出标记抗体或蛋白质。