重组抗体是基于生物信息学的氨基酸序列分析,是基于结构生物学的同源建模以及计算机辅助设计和抗体改造,是基于空间结构的序列分析的重要氨基酸的回复突变。重组抗体具有较高的一致性和可重现性,灵敏度和特异性。此外,利用重组技术生产抗体能够满足抗体的大规模生产需求。重组抗体的发展经历了鼠源单抗,人鼠嵌合抗体,人源化抗体和全人抗体四个阶段。重组抗体药物的发展已成为目前生物制药的主流。本专题主要从重组抗体开发和生产两方面入手,系统地阐述了重组抗体的概念并介绍了抗体库的构建及筛选方法。

重组抗体

什么是重组抗体

重组抗体是通过DNA重组技术将抗体相应序列根据需要进行改造和重组,并通过外源表达技术将构建好的质粒转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。

单链抗体(scFv)

scFv单链抗体,是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一个10-25个氨基酸组成的柔性短肽连接而成,是最小的重组抗体形式。

Fab Antibody

Fab抗原结合片段由完整的轻链(可变区和恒定区)和部分重链结构(可变区和一个恒定区片段)组成,轻链与重链通过一个二硫键连接。

单域抗体(VHH纳米抗体)

单域抗体只包含单一的抗体可变区,同常规的抗体一样,它也能够选择性地结合特定抗原。单域抗体的分子量远小于由两条重链和两条轻链组成的普通抗体。

嵌合抗体

嵌合抗体是由鼠源性抗体的V 区基因与人抗体的C 区基因拼接为嵌合基因,然后插入载体,转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。

Fc融合蛋白

Fc融合蛋白是指利用基因工程等技术将某种具有生物活性的功能蛋白分子与免疫球蛋白(IgG、IgA 等)的 Fc片段融合而产生的新型重组蛋白。

双特异性抗体

双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)又称双功能抗体,是基因工程抗体的一种,具有两个不同的抗原结合位点,可同时结合两个靶抗原。

人源抗体

人源抗体主要指鼠源单克隆抗体以基因克隆及DNA重组技术改造,重新表达的抗体,其大部分氨基酸序列为人源序列取代,基本保留亲本鼠单抗的亲和力和特异性。

抗体库构建

抗体库的基本类型

抗体库技术是利用基因工程的方法将全套抗体轻重链可变区基因克隆到质粒中并表达,然后利用不同抗原筛选出携带特异性抗体基因的克隆,从而获得相应特异性抗体。

核糖体展示单链抗体库构建

核糖体展示技术是由Plückthun实验室在多聚核糖体展示技术的基础上改进而来的一种利用功能性蛋白相互作用进行筛选的新技术。

抗体库筛选

抗体库的筛选方法

噬菌体抗体库技术是一项新的基因工程抗体制备技术,在人源性抗体的克隆,抗体性能的改造,以及抗体基因的研究等方面都具有重要的理论及实用价值。

酵母展示抗体库筛选抗体

酵母表面展示是将特定肽/蛋白质基因与酵母自身分泌到细胞外或定位在细胞壁上的基因融合,并利用酵母细胞作为展示颗粒,用流式细胞仪定量筛选高亲和力的特定肽。